酸性磷酸酶的顯示方法
更新時間：2016-05-25 瀏覽次數：2852
實驗試劑
1. 10％中性福爾馬林(pH6．8～7．1)甲醛 10ml 蒸餾水 90ml 醋酸鈉 2g
2. 酸性磷酸酶作用液
蒸餾水 90ml 0．2mol／L醋酸緩沖液(pH4．6) 12ml 5％* 2ml
3. 2％β—甘油磷酸鈉 4ml
先將蒸餾水和醋酸緩沖液混合，隨后分成大致相等的兩份，一份中加*溶液，另一份加甘油磷酸鈉溶液，然后再將兩者緩緩混合，邊混邊攪勻后若酸堿度值不到pH5．0，可加少量醋酸的調整。此作用液在臨用前配制，不能貯存。配好后的作用液應透明無絮狀懸浮物和沉淀，否則將嚴重影響實驗結果。
4. 1％硫化胺溶液
硫化胺 1ml 蒸餾水 9ml
5. 姬姆薩染液(1：30)
姬姆薩原液 3滴 磷酸鹽緩沖液(pH6．8) 5ml
6. 6％淀粉肉湯
牛肉膏 0．3g 蛋白胨 1.0g 氯化鈉 0．5g 蒸餾水 100ml
高壓滅菌9．9×104pa(15磅)20min，再加入可溶性淀粉6g，水溫浴，促使溶解后置冰箱保存備用。
實驗步驟
1. 取小白鼠一只，每日腹腔注射6％淀粉肉湯1ml，連續注射三天。
2. 在第三天注射后3～4h，再向腹腔注射生鹽水1ml，過3min后在原注射部位抽取腹腔液0．1～0．2ml。請注意!注射和抽液的進針部位和深度要保持一致。否則可能抽不出腹腔液。
3. 將腹腔液滴在預冷的載玻片上，每片1～2滴，涂片，將玻片垂直插入玻片架，迅速放到冰箱內(4℃)，讓細胞自行鋪展。
4. 30min后，將玻片轉入10％中性福爾馬林，冰箱內4℃固定30min。
5. 自來水漂洗5min，把水甩干。
6. 轉入酸性磷酸酶作用液中，37℃處理30min。
7. 自來水漂洗片刻。
8. 1％硫化胺處理3～5min。
9. 自來水沖洗，甩干。
10.用1∶30的姬姆薩染液染色15min。
11.自來水沖去染液，用磷酸鹽緩沖液臨時封片，鏡檢。
12.對照實驗：
將第3步的腹腔液涂片置50℃溫箱中處理30min，使酶失活，再進行6～11步的同樣實驗。
- (上一篇)：RNAi實驗原理與方法
- (下一篇)：IEF分離蛋白質