臍帶血干細胞的準備
更新時間：2015-01-06 瀏覽次數：1566
臍帶血干細胞的準備
試劑和材料：
1.運輸培養基：Eagle基礎培養基（EBM），添加300U/ml青霉素和300μg/ml鏈霉素，150μg/ml慶大霉素和1μg/ml兩性霉素B；
2.夾子；
3.剪刀；
4.抗凝劑：CPDA-1：122mmol/L（26g/L）枸櫞酸鈉，0.142mol/L（25.5g/L）葡萄糖，15.6 mmol/L（3.0g/L）枸櫞酸和18.3 mmol/L（2.2g/L）磷酸二氫鈉；
5.etadine﹡或70%乙醇；
6.18號注射器針頭；
7.臍帶收集袋，175ml，含24.5ml CPDA-1；
8.50ml注射器，含200I.U.肝素
實驗方法：
1.出生后，用兩個夾子在近新生兒的末端和近胎盤的末端夾住臍帶以封閉臍帶；
2.剪下兩個夾子間的臍帶，一端在接近新生兒處，另一端剪去胎盤；
3.剪下臍帶后放入運輸培養基中送去實驗室，整個處理過程在6-12h內；
4.用Betadine或70%酒精的棉花擦拭針頭插入位點，位點在臍帶近胎兒末端；
5.為了收集到zui大量的臍血，臍帶的處理動作要盡可能小；
6.接著用收集袋或50ml注射器的針頭插入步驟2中處理好的臍靜脈插入位點；
7.將收集袋保持在低于插入位點的水平，以利于臍血在重力作用下流入容器中，或者用50ml注射器緩慢地將臍血從臍靜脈內抽出。盡可能多地收集臍血，一般能收集到60-150ml；
8.如果出現靜脈滑脫，可沿臍帶稍上處用Betadine或70%酒精消毒后重新插入針頭；
9.血流停止后，打開針頭安全帽，將它推入鎖定位置。注意：臍血應該保存于室溫，不要冷藏；
10.如果使用袋裝，用附帶的卡環夾住管子，盡可能接近血袋處打兩個安全結以防止泄露，然后剪去針頭，將針頭放入尖頭容器中丟棄；
11.輕輕轉動血袋或注射器幾次，使臍血與抗凝劑充分混合；
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