細(xì)胞技術(shù)專題：細(xì)胞傳代實(shí)驗(yàn)
更新時(shí)間：2014-03-03 瀏覽次數(shù)：1135
根據(jù)細(xì)胞生長的恃點(diǎn)，傳代方法有3種：懸浮生長細(xì)胞傳代、半懸浮生長細(xì)胞傳代（Hela細(xì)胞）、貼壁生長細(xì)胞傳代。
實(shí)驗(yàn)方法
- 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
- 消化法
| 實(shí)驗(yàn)方法原理 | 培養(yǎng)細(xì)胞傳代根據(jù)不同細(xì)胞采取不同的方法。貼壁生長的細(xì)胞用消化法傳代；部分貼壁生長的細(xì)胞用直接吹打可傳代；懸浮生長的細(xì)胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打傳代。 |
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| 實(shí)驗(yàn)材料 | 細(xì)胞 |
| 試劑、試劑盒 | D-Hanks液 小牛血清 RPMI1640 雙抗 胰蛋白酶 EDTA NHCl NaHCO3 |
| 儀器、耗材 | 凈化工作臺(tái) 離心機(jī) 恒溫水浴箱 冰箱 倒置相差顯微鏡 培養(yǎng)箱 吸管 玻璃瓶 培養(yǎng)瓶 廢液缸 吸頭 槍頭 膠塞 離心管 量加樣槍 紅血球計(jì)數(shù)板 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 1. 貼壁細(xì)胞的消化法傳代：
（3）向瓶內(nèi)加入適量消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，使消化液流遍所有細(xì)胞表面。
（5）消化在37℃或室溫25℃以上環(huán)境下進(jìn)行。
（7）吸除或倒掉消化液，如用EDTA消化，需加Hanks液數(shù)毫升，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶把殘留消化液沖掉。
（9）用彎頭吸管，吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液，反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，吹打過程要順序進(jìn)行。
（11）計(jì)數(shù)，分別接種在新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
2. 懸浮細(xì)胞的傳代：懸浮細(xì)胞傳代可離心收集細(xì)胞后傳代，或直接傳代。
（2）離心800~1000 rpm，5 min。
（3）棄去上清，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，用吸管吹打形成細(xì)胞懸液。
（4）計(jì)數(shù)，分別接種在新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
（5）直接傳代即讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清液吸掉1/2~2/3，然后用吸管吹打形成細(xì)胞懸液后再傳代。
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| 注意事項(xiàng) | 1. 胰蛋白酶要預(yù)溫，溫度37℃左右為宜℃。
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