細胞技術專題：光學顯微鏡檢測腫瘤細胞形態實驗
更新時間：2014-02-20 瀏覽次數：1449
標簽： 光學顯微鏡 檢測 腫瘤 細胞形態
光學顯微鏡檢測腫瘤細胞形態可以：（1）輔助判斷腫瘤細胞是否凋亡；（2）用于病理檢查；（3）提取腫瘤細胞微細結構信息。
詳細
實驗方法
- 瑞氏-吉姆薩混染法
- HE染色法
| 實驗方法原理 | 吉姆薩染液由天青，伊紅組成。染色原理和結果與瑞特染色法基本相同。
1）嗜酸性顆粒為堿性蛋白質，與酸性染料伊紅結果，染粉紅色，稱為嗜酸性物質； 2）細胞核蛋白和淋巴細胞 胞漿為酸性，與堿性染料美藍或天青結合，染紫藍色，稱為嗜堿性物質； 3）中性顆粒呈等電狀態與伊紅和美藍均可結合，染淡紫色，稱為中性物質。
PH對細胞染色有影響。細胞各種成分均分布蛋白質，由于蛋白質系兩性電解質，所帶電荷隨溶液PH而定，在偏酸性環境中下在電荷增多，易與伊紅結合，染色偏紅；在偏堿性環境中負電荷增多，易與美藍或天青結合，染色 偏藍。因此細胞染色對氫離子濃度十分敏感，染色用玻片必須清潔，無酸堿污染。配制必須用甲醇，稀釋染色必須用緩沖液，沖洗用水應近中性，否則可導致各種細胞染色反應異常，以致識別困難，甚至造成錯誤。
用途：適合大多數細胞組織的染色，包括血涂片、各種組織石蠟切片、冰凍切片、以及各種培養細胞。染色體顯帶、多種微生物的鑒別染色和細胞凋亡的檢測等。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 腫瘤細胞 |
| 試劑、試劑盒 | 甲醛 二甲苯 Gimsa染液 Sorensen磷酸緩沖液 香柏油 蒸餾水 |
| 儀器、耗材 | 光學顯微鏡 樹膠 載玻片 蓋玻片 洗瓶 離心機 離心管 |
| 實驗步驟 | 一、試劑配制
1. 瑞氏染液配制
稱瑞氏染料0.1 g于研缽，少量多次加入AR級甲醇至*溶解，后補充至60 ml棕色瓶密封保存，可加3 ml甘油防止揮發。
2. 吉姆薩染液配制
0.1 g吉姆薩染料放入有6.6 ml甘油的圓錐燒瓶內，56度，水浴90-120 min，當染料與甘油充分混合后加入6.6 ml甲醇，充分搖勻后過濾，棕色瓶室溫可保存一周。
二、染色
3. 液化精液2 000/ rmin 離心10 min，等滲鹽水洗3遍，涂片后自然干燥。
4. 臨用前，瑞、吉染液按10：1混合，染色30-60 s。
5. 加等量PBS（pH6.9），再染10 min。
6. 自來水沖洗，自然干燥后，即可鏡檢，也可直接香柏油兼做透明與封片。 |
- (上一篇)：細胞技術專題：大鼠乳鼠成骨細胞培養實驗
- (下一篇)：細胞技術專題：小鼠肝細胞原代培養實驗