蛋白質技術專題：重組DNA技術與基因工程（組圖）
更新時間：2013-11-27 瀏覽次數：1474
重組DNA技術是現代分子生物技術發展中zui重要的成就之一。即是基因工程（Gene Engineering）的核心技術。
重組DNA技術（Recombinant DNA Technique）是人類根據需要選擇目的基因（DNA段）在體外與基因運載體重組，轉移至另一細胞或生物體內，以達到改良和創造新的物種和治療人類疾病的目的。
這一技術的發展和應用，關鍵在于限制酶的發現和應用。
一、限制酶
限制性內切核酸酶（restrictive endonucleases），又稱限制酶。是特異性地切斷DNA鏈中磷酸二酯鍵的核酸酶（“分子手術刀”）。
發現于原核生物體內，現已分離出100多種，幾乎所有的原核生物都含有這種酶。是重組DNA技術和基因診斷中重要的一類工具酶。
1、限制酶的命名
根據其來源命名。如：
EcoRI來源于大腸桿菌E.coli的RY13菌株,I指在該菌株中分離的*個限制酶。
2、限制酶識別序列和切割形成
每種限制酶能識別和切割的通常4～8個核苷酸序列，稱為限制性位點或切點。
部分常用限制酶及切點
互補末端連接
產生相同序列的突出末端的不同片段 可有三種方式：
1）用同一種限制酶切割；
2）用識別相同靶序列的不同限制酶切割；
3）用識別不同靶序列但可產生一致的粘性末端的限制酶切割。
3、特點：
根據上述限制酶的特點，在基因工程和基因診斷中的重要用途：
1） 不論DNA的來源如何，同一種限制酶切割后產生的粘性末端容易重新連接。因此可將不同種屬的DNA重組。如人和質粒DNA等。
2） 用于人類基因組的DNA分析，具特定的酶切位點。
3） Gene突變改變酶切位點的消失或新產生將改變酶切片段長度。應用于限制性片段多態性分析。
二、基因運載體及其選擇
載體（Vector）:將外源目的DNA導入受體細胞，并能自我復制和增殖的工具。
載體具以下特征：
1）分子量小，便于攜帶較大的DNA段，能進入宿主細胞并在其中增殖；
2）有多種限制酶切點，每種限制酶只有單一切點；
3）被切割后的載體，插入外源DNA后，不影響其復制能力，并有可選擇的標記基因（如，抗藥基因）。
常用的載體有：質粒，λ噬菌體，粘粒，BAC，YAC，PI等。
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