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DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：DNA印跡雜交分析實(shí)驗(yàn)
更新時(shí)間：2013-08-22 瀏覽次數(shù)：1329
雜交分析的原理是特定序列的單鏈DNA分子（即通常標(biāo)記的“探計(jì)”）可與另一個(gè)固定了的具有互補(bǔ)序列（“靶”序列）的DNA分子或RNA分子形成堿基配對(duì)，雜交分子的穩(wěn)定性取決于發(fā)生堿基配對(duì)的程度，這一技術(shù)可檢測(cè)復(fù)雜基因組中的單拷貝基因。
實(shí)驗(yàn)方法
- 放射標(biāo)記法
| 實(shí)驗(yàn)方法原理 | 本方案適合于用100~1 000 bp 長(zhǎng)的放射性標(biāo)記的DNA探針對(duì)Southern轉(zhuǎn)印、斑點(diǎn)及狹線印跡進(jìn)行雜交分析。 |
|---|---|
| 實(shí)驗(yàn)材料 | DNA |
| 試劑、試劑盒 | SDS SSC |
| 儀器、耗材 | 水浴鍋 培養(yǎng)箱 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 1. 用6×SSC潤(rùn)濕帶有固定了的DNA的膜。 2. 將膜的DNA面朝上置于雜交管中，ATP溶液的加入量為約1 ml/cm2 膜，在68℃雜交爐中滾動(dòng)3 h。 3. 在預(yù)雜交即將結(jié)束時(shí)，于100℃將DNA探針變性10 min，置于冰中。 4. 將雜交管中的APH溶液倒掉，換上等體積的預(yù)熱的APH溶液（68℃），加入變性探針，68℃滾動(dòng)下雜交過。 5. 倒掉APH液，加入等體積的2×SSC/0.1%SDS，室溫下滾動(dòng)溫育10 min。5 min后更換洗膜液。 6. 用等體枳的0.2×SSC/0.1%SDS替換上述洗膜液，室溫下滾動(dòng)溫育10 min 后更換洗膜液 7. 如果需要，在42℃，0.2×SSC/0.1%SDS進(jìn)行15 min 中等嚴(yán)緊度的洗膜2次。 8. 如果需要，在68℃，0.1×SSC/0.1%SDS進(jìn)行15 min 高等嚴(yán)緊度的洗膜2次。 9. 倒掉zui后的洗膜液，在室溫下用2×SSC漂洗膜，并吸干多余的液體，用塑料膜包裹后放射自顯影。 |