DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：限制性?xún)?nèi)切酶消化DNA實(shí)驗(yàn)
更新時(shí)間：2013-07-27 瀏覽次數(shù)：2422
標(biāo)簽： 限制性?xún)?nèi)切酶 消化 DNA
影響限制性?xún)?nèi)切酶反應(yīng)的因素很多。DNA制品中的污染均能抑制酶切活性。這種抑制可通過(guò)增加酶作用單位數(shù)、增大反應(yīng)體枳以稀釋可能的抑制劑或延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間來(lái)加以克服。
實(shí)驗(yàn)方法
- 單酶單DNA樣品消化
- 消化多個(gè)DNA
- 部分消化
| 實(shí)驗(yàn)方法原理 | 進(jìn)行限制酶切割反應(yīng)只需簡(jiǎn)單地將酶和DNA樣品放在合適的反應(yīng)緩沖液溫育，其中DNA和酶的量、緩沖液的離子強(qiáng)度、溫育溫度和時(shí)間都依具體的反應(yīng)而改變。 |
|---|---|
| 實(shí)驗(yàn)材料 | DNA |
| 試劑、試劑盒 | TE 酶切緩沖液 EDTA |
| 儀器、耗材 | 電泳儀 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 1. 混合下列溶液于一個(gè)無(wú)菌的微量離心管中
2. 加入限制性?xún)?nèi)切酶（1~5 U/μg DNA）在推薦的溫度溫育1 h （—般是37℃）。
5. 加入5 μl 電泳加樣緩沖液終止反應(yīng)，進(jìn)行瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠電泳。
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