專題：細(xì)胞轉(zhuǎn)染操作方法
更新時(shí)間：2013-07-08 瀏覽次數(shù)：1706
1. 試驗(yàn)準(zhǔn)備：200ul/1mlTip頭各一盒（以上物品均需高壓滅菌），酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號(hào)筆，培養(yǎng)皿，離心管。
2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用1ml的PBS溶液洗滌兩次。
3. 用Tip頭加入1ml Trypsin液，消化1分鐘（37℃，5%CO2 ）。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細(xì)胞*從壁上脫落下來為止。
4. 加入1ml的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。
6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm離心5min。
7. 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇0.8X106個(gè)細(xì)胞加入一個(gè)35mm培養(yǎng)皿。
8. 將合適體積*培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。
9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。
① 將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。
4. 吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次。
5. 加入混合液，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個(gè)小時(shí)。
6. 到時(shí)后，根據(jù)細(xì)胞種類決定是否移除混合液，之后加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24－48小時(shí)。
1. 在轉(zhuǎn)染后24小時(shí)，觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果并記錄綠色熒光蛋白表達(dá)情況。
2. 再次進(jìn)行細(xì)胞傳代，按照免疫染色合適的密度0.8X105個(gè)細(xì)胞/35mm培養(yǎng)皿將細(xì)胞重新轉(zhuǎn)入培養(yǎng)皿中。