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R&D Systems DuoSet® ELISA Kit 選購注意事項
更新時間：2013-03-19 瀏覽次數：5466
一、什么樣的客戶適合選用DuoSet ELISA?
主要為客戶篩選高通量的指標而設計的，適合熟悉ELISA研發的實驗人員使用。沒有ELISA經驗，進行ELISA檢測的客戶不建議使用。
二、DuoSet ELISA Kit 里面一共有多少塊板子？
1個DuoSet試劑盒包含的試劑可以滿足大約15塊96孔微孔板的檢測。
三、DuoSet ELISA Kit檢測的樣本類型是什么？
檢測樣本類型：細胞培養的上清液
熟悉ELISA研發的實驗人員已成功將其推廣到血清和血漿樣本的使用。如果要決定試劑盒是否可用于組織勻漿（或其它未經檢驗）的樣本，實驗者先做一個“摻入和回收預試驗”。
簡單來說，實驗者將樣本分為兩份：一份中摻入一定量的試劑標準，然后做一稀釋系列（一般稀釋到1:16），再將摻入過的一份同未摻入的一份相比。采用以下的公式來計算回收率（%）：測試值（pg /毫升）/ 期待值（pg /毫升）x 100% = % 回收率。一般來說，回收率在80-120%可認為是可接受的。但是，可接受范圍應由每一實驗室自行決定。這種方法可用于檢定未被R&D Systems檢定的任何樣本。我們還有更加詳細的“摻入和回收”的實驗步驟，可向我們的技術服務部索取。我們也可進一步查閱文獻看一看是否有其他試驗人員用我們的產品做過不同的樣本，或不同的屬種。
四、DuoSet ELISA Kit包括哪些組分？
DuoSet 包括4種組分：
Ø 捕獲抗體（Capture Antibody）
Ø 檢測抗體 （Detection Antibody）
Ø 標準品（Recombinant Standard）
Ø 親和素-辣根過氧化物酶（Streptavidin-HRP）
五、DuoSet ELISA Kit需要另行購買的輔助試劑有哪些？
PBS:137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 8.1 mM Na2HPO4, 1.5 mM KH2PO4, pH 7.2 - 7.4, 0.2 µm filtered
Wash Buffer: （Catalog # WA126）, or equivalent
Reagent Diluent*
Blocking Buffer*
Substrate Solution: 1:1 mixture of Color Reagent A （H2O2） and Color Reagent B （Tetramethylbenzidine） （Catalog # DY999）
Stop Solution: 2 N H2SO4 （Catalog # DY994）
Microplates: R&D Systems （Catalog # DY990）, or equivalent
Plate Sealers: ELISA Plate Sealers （Catalog # DY992）, or equivalent
*For the Reagent Diluent and Blocking Buffer recommended for a specific DuoSet ELISA Development Kit, please see the product datasheet.
Wash Buffer: （Catalog # WA126）, or equivalent
Reagent Diluent*
Blocking Buffer*
Substrate Solution: 1:1 mixture of Color Reagent A （H2O2） and Color Reagent B （Tetramethylbenzidine） （Catalog # DY999）
Stop Solution: 2 N H2SO4 （Catalog # DY994）
Microplates: R&D Systems （Catalog # DY990）, or equivalent
Plate Sealers: ELISA Plate Sealers （Catalog # DY992）, or equivalent
*For the Reagent Diluent and Blocking Buffer recommended for a specific DuoSet ELISA Development Kit, please see the product datasheet.
六、客戶使用了DuoSet ELISA開發系統，但幾乎就沒有顏色產生。哪些步驟可能出了問題？
很多方面都會影響到顏色的產生。比如：
1） BSA的干擾。選擇不含脂肪酸的ELISA級別的BSA很重要，可以降低球蛋白對實驗的干擾。R&D Systems建議使用millipore的BSA（目錄#82-045）。
2） 非室溫下的試劑在使用時會抑制信號；如果室溫過低，信號也會被抑制。
3） 如果使用了未表明為“高結合性ELISA”的微孔板，捕獲抗體同微孔板的結合就不牢固，從而導致測試的顏色產生過低。R&D Systems建議使用R&D（cat#DY990,25pcaks） 或者Costar EIA Plate （cat#2592）。
4） 任何試劑，如果配制出錯、儲藏不當、或已過期，都將出現這一問題。R&D Systems建議：捕獲抗體、檢測抗體、標準品、親和素-辣根過氧化物酶溶解之后必須在都有效期內使用完。
5）讀板時使用的波長同底物的波長不一致。
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