細胞轉(zhuǎn)染實驗步驟
更新時間：2012-12-05 瀏覽次數(shù)：2783
一、實驗?zāi)康?/strong>
學(xué)習(xí)和掌握外源基因?qū)胝婧思毎闹饕椒?mdash;—脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染。了解外源基因進入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達（綠色熒光蛋白），為染色準備實驗材料。
二、實驗原理
上圖所示是脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染的示意圖，它顯示了外源質(zhì)粒進入細胞的一般過程。
外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導(dǎo)法和病毒介導(dǎo)法。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質(zhì)粒進入；磷酸鈣法和脂質(zhì)體法是利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞；病毒法是利用包裝了外源基因的病毒感染細胞的方法使得其進入細胞。但是由于電擊法和磷酸鈣法的實驗條件控制較嚴、難度較大；病毒法的前期準備較復(fù)雜、而且可能對于細胞有較大影響；所以現(xiàn)在對于很多普通細胞系，一般的瞬時轉(zhuǎn)染方法多采用脂質(zhì)體法。
利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法zui重要的就是防止其毒性，因此脂質(zhì)體與質(zhì)粒的比例，細胞密度以及轉(zhuǎn)染的時間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要問題，通過實驗摸索的合適轉(zhuǎn)染條件對于效率的提高有巨大的作用。
上圖是本次實驗采用的脂質(zhì)體中陽離子組分的結(jié)構(gòu)的示意圖。
本次實驗采用的脂質(zhì)體是promega公司的TransFast脂質(zhì)體試劑，它是一種陽離子脂質(zhì)體和中性脂質(zhì)體的混合物，是對于本次實驗中采用的293T細胞優(yōu)化的轉(zhuǎn)染試劑。
三、實驗材料與器材
1、材料
293T細胞
MyoD表達質(zhì)粒和EGFP表達質(zhì)粒
DMEM培養(yǎng)基
鏈霉素/青霉素（雙抗）
FCS（小牛血清）
PBS（磷酸鹽緩沖溶液）
胰酶/EDTA消化液
轉(zhuǎn)染試劑（TransFast）