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幽門螺桿菌是微需氧菌，環境氧要求5～8%，在大氣或厭氧環境下不能生長。許多固體培養基可作幽門螺桿菌分離培養的基礎培養基，布氏瓊脂使用較多，但需加用適量全血或胎牛血清作為補充物方能生長。常以萬古霉素、TMP、兩性霉素B等組成抑菌劑防止雜菌生長。
幽門螺桿菌對臨床微生物實驗中常用于鑒定腸道細菌的大多數經典生化實驗不起反應。而氧化酶、觸酶、尿素酶、堿性磷酸酶、r－谷氨酰轉肽酶、亮氨酸肽酶這七種酶反應是作為幽門螺桿菌生化鑒定的依據。
培養方法：用OXOID 公司CM0331哥倫畢業培養基19.5g配650培養液，加30ml脫纖維羊血。如果需要密集增菌，同時加適量OXOID 公司CM1135心腦培養基