ATCC凍干菌種活化方法
更新時間：2012-10-11 瀏覽次數：4645
低溫保存管（cryo tube）中之一般菌種臨時存放及活化
A. 低溫保存管之臨時存放及解凍
1. 低溫保存管（cryo tube）應存放于－20℃ ~ －80℃之低溫條件下。
2. 準備 37℃之 70﹪（V/V）酒精浴槽（只能在電氣水浴槽中改放酒精，不可以火加溫，以免危險；若以 37℃水浴取代，應避免水中微生物污染），其中事先安放小試管架（可放置 cryotube 之大小），液面不可高達管塞。
3. 將 cryotube 從低溫保存條件中取出，置于 37℃浴槽之小試管架上。
4. 不斷輕微搖動 cryotube，液面不可高至管塞，直至結冰*溶解（約需 2 分鐘）。
C. 菌株活化: 在無菌操作下
1. 用無菌微量吸管，從已溶解之 cryotube 吸取 50 ?l（或 1 ~ 2 滴）之菌液，滴入固態培養基（培養基編號及溫度示于菌株訂購單）某一邊緣附近，以劃線法接種于培養基。
2. 將接種好的培養基置于溫度的培養箱中培養。
D. 圖示
（1）金屬接種環
（2）平板劃線法
冷凍干燥管之開管說明
下列步驟請在無菌環境下操作：
1、以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加熱外管之。
2、滴數滴無菌水于加熱處，使外管破裂，再以硬棒敲破。
3、取出隔熱纖維紙和內管，以滅菌過的鑷子取出內管之棉塞。
4、（ a ） 適用于細菌
用無菌吸管，吸取0.3-0.5 ml之液體培養基，滴入內管內，并輕微震蕩（可用該吸管協助），直到均勻懸浮。
（ b ） 適用于霉菌、酵母菌
用無菌吸管，吸取0.3-0.5 ml無菌水，滴入內管內，待干燥粉末溶解后，以無菌吸管吸取并滴入約含有5ml無菌水之試管內，輕微震蕩使其均勻后，靜置30至60分鐘。
5、取0.1-0.2 ml之菌體懸浮液于的平板培養基上，做劃線分離培養或做成一系列之稀釋，用無菌L型玻棒均勻涂抹，以檢驗菌種之純度及活化情形，而剩余的菌體則全部移入的液體培養基內，并依的溫度培養之。
6、某些菌種經過冷凍干燥保存后，遲滯期 （ lag period ） 較長，必須等培養二倍時間后才能長出，且再經過一、二次繼代培養 （Subculture） 后才能正常生長。經過以上的努力后仍培養失敗，才視為不能活化。
7、若菌種未能活化，或活化之菌落有疑問時，請于收到菌種之一個月內，以問題菌株反應單傳真至本中心，即進行處理。
8．未開封之冷凍干燥管，請冷藏于4℃冰箱，切勿冷凍保存。
B. 劃線法
1. 手持金屬接種環，用酒精燈將接種環（共約 5 公分）燒至火紅，并不斷來回燒烤金屬固定桿之前約 10 公分，等待約 10 秒鐘，將接種環前端輕觸培養基邊緣凝膠（無菌體部份），待接種環*冷卻后，以環沾黏菌滴，由培養基邊緣向中央輕輕橫劃緊接的并行線，直到涵蓋 1/3 培養基為止（I 區）。
2. 灼燒接種環，待數秒冷卻后，旋轉培養基自 I 區涂布的邊緣再橫劃數條線到未接種的區域（II 區）。
3. 重復 2. 的動作完成 III 區與 IV 區。
4. 灼燒接種環，將接種環歸位。
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